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幽门螺杆菌的生化反应及其尿素酶!

2019-07-16 09:05:31  来源:樊代明

Hp对临床微生物学实验室中常用于鉴定肠道细菌的大多数经典生化实验不起反应。McNulty等人试验了大量Hp菌株的许多种预成酶(preformed enzyme),发现Hp能产生氧化酶、触酶、尿素酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶,它们是高度同源性的一族。而它们对其他8种氨肽酶、2种脂酶、8种糖苷酶、18种单糖发酵酶、9种其他酶均不起反应,因此前述7种酶的测定可以作为Hp生化鉴定的依据,但这些酶的测定对Hp的生物分型毫无帮助。

尿素酶是一种人和动物胃肠道及泌尿道感染病原菌经常分泌的酶,它既是致病菌的致病因子,又是某些氮源性腐败物转化所必需的酶之一。Hp的尿素酶的理化性状,及其在Hp感染过程中的地位均有其独特性,因此近年来国际上有关尿素酶研究的文献几乎都集中在Hp的尿素酶上。

(l)Hp尿素酶的作用 尿素酶能水解尿素产生氨和氨基甲酸,氨基甲酸随后又自然降解成另一分子氨和碳酸。 在溶液中,释放的碳酸和2分子的氨,又分别平衡成如下的离子式,结果使溶液碱性化。 H2CO3==H+ + HCO3 - 2NH3+2H2O== 2NH+4+2OH-

(2)Hp尿素酶的理化性状 Hp尿素酶的Mr为380000~600000,它的比活性(specific activity)在1.100~3.l89U/mg。Km值为0.17mM,pI=5.9[21],最适温度45℃、最适pH8.2。阳离子对Hp尿素酶活性的释放和稳定性作用如下[22]:在分别含l.5或10mM Ca++、Mg++、K+、Na+、EDTA或EGTA的水溶液中加温部分纯化的Hp尿素酶,结果对其活性丝毫没有影响;反之,在1mM的Fe+++、Ca++、Co++或Zn++则可抑制其大部分活性(>80%)。10mMFe++、Mn++和Ni++约抑制其30%的活性,加入Ca++或Mg++,可显著地降低用水从完整Hp对尿素酶的抽提率。在4℃,酶活性的稳定性因加入甘油或2-Mercaptoethanol而加强;但是,即使活性丧失后,其抗原性仍然保留。现在除了上述某些二价阳离子对Hp尿素酶有抑制作用外,尚有三类物质:氧肟酸〈Hydroxamic acid〉,磷酸氨基化合物(Phosphoroamide compounds),巯基化合物(Thiol compounds)可能对其有抑制作用。

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